临床麻醉学杂志

作者：李元耀,王圣钊,张靖豪,殷永强,王庆云,钟毅

单位：550001,贵阳市,贵州医科大学附属医院麻醉科,550001,贵阳市,贵州医科大学附属医院麻醉科,贵州医科大学麻醉学院,550001,贵阳市,贵州医科大学附属医院麻醉科,贵州医科大学麻醉学院,550001,贵阳市,贵州医科大学附属医院麻醉科

关键词：糖尿病,急性肾损伤,焦亡,沉默信息调节因子1,乙酰化,叉头状转录调节因子3a,

基金：大学生创新创业训练计划（202110660007）；贵州省卫健委科学技术基金（gzwkj2022-124）

目的 探究Sirt1在急性炎症状态下糖尿病小鼠肾损伤中的作用及分子机制。方法 选择SPF级C57BL/6J雄性小鼠40只，8周龄，体重20～25 g。采用随机数字表法将小鼠分为五组：对照组（C组）、糖尿病组（D组）、脂多糖（LPS）+糖尿病组（L组）、LPS+糖尿病+Sirt1阻断剂EX527组（E组）和LPS+糖尿病+Sirt1激动剂银杏黄酮苷元组（G组），每组8只。糖尿病小鼠模型制备成功后，L组腹腔注射LPS 10 mg/kg；E组在糖尿病小鼠给予LPS处理前1 h腹腔注射EX527 5 mg/kg（溶于DMSO 0.2 ml）；G组在糖尿病小鼠给予LPS处理前1 h腹腔注射银杏黄酮苷元200 mg/kg（溶于DMSO 0.2 ml）；C组和D组在相同时点腹腔注射2%DMSO 0.15 ml。收集24 h尿液测定24 h尿量和24 h尿蛋白浓度，眼球取血检测血清肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）浓度。取肾组织后采用ELISA法检测IL-1β、IL-18浓度，硝酸还原酶法检测一氧化氮（NO）含量，铁离子抗氧化能力法检测总抗氧能力（T-AOC），qPCR和Western blot法检测Sirt1、caspase-1、NLRP3、ASC mRNA表达量和蛋白含量，免疫共沉淀法检测乙酰化FoxO3a蛋白含量，二氢乙锭染色法计算活性氧（ROS）含量，免疫荧光双重染色法计算细胞焦亡率，并进行HE染色，光镜下观察病理。结果 与C组比较，D组、L组、E组和G组24 h尿量明显增多，尿蛋白浓度、血清Scr和BUN浓度、肾组织IL-1β、IL-18、NO含量、NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表达量和蛋白含量、ROS含量和焦亡率均明显升高（P<0.05），T-AOC活力明显降低（P<0.05）。与D组比较，L组、E组和G组24 h尿量明显增多，尿蛋白浓度、血清Scr和BUN浓度、肾组织IL-1β、IL-18、NO含量、NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表达量和蛋白含量、ROS含量和焦亡率均明显升高（P<0.05），T-AOC活力明显降低（P<0.05）。与L组比较，E组24 h尿量明显增多，尿蛋白浓度、血清Scr和BUN浓度、肾组织IL-1β、IL-18、NO含量、NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表达量和蛋白含量、乙酰化FoxO3a蛋白含量、ROS含量和焦亡率均明显升高（P<0.05），T-AOC活力、Sirt1 mRNA和蛋白含量、FoxO3a mRNA表达量均明显降低（P<0.05）；G组24 h尿量明显减少，尿蛋白浓度、血清Scr和BUN浓度、肾组织IL-1β、IL-18、NO含量、NLRP3、caspase-1、ASC mRNA表达量和蛋白含量、乙酰化FoxO3a蛋白含量、ROS含量和焦亡率均明显降低（P<0.05），T-AOC活力、Sirt1 mRNA表达量和蛋白含量均明显升高（P<0.05）。与E组比较，G组24 h尿量明显减少，尿蛋白浓度、血清Scr和BUN浓度、肾组织IL-1β、IL-18、NO浓度、NLRP3、caspase-1和ASC mRNA表达量和蛋白含量、乙酰化FoxO3a蛋白含量、ROS含量和细胞焦亡率均明显降低（P<0.05），T-AOC活力、Sirt1 mRNA表达量和蛋白含量均明显升高（P<0.05）。结论 在急性炎症状态下的糖尿病小鼠中，Sirt1升高可以降低乙酰化FoxO3a蛋白含量，减少小鼠尿量，降低尿蛋白、Scr、BUN含量、肾组织中炎性因子浓度和细胞焦亡水平，减轻氧化应激和炎症水平，从而减轻肾损伤。

来源：2023年第12期

《临床麻醉学》期刊编辑部

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